产品货号：
KD1165
中文名称：
R5421(CY162)感受态细胞
英文名称：
R5421 Chemically Competent Cell
产品规格：
10×100μL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：-80℃
产品储存：-80℃保存，6个月有效。
产品组成：
基因型：
MATa ura3-52 leu2 trk1Δ his3Δ200 his4-15 trk2Δ1::pCK64
产品说明：
R5421酿酒酵母菌株为K+/钾离子缺陷型菌株，在文献中也称为CY162，MATα型，多用于K+/钾离子转运蛋白的鉴定试验中，也可用于K+/钾离子通道或钠钾离子泵的鉴定试验。Transformation marker为：ura3，leu2，该菌株可以在含有100mM KCl的培养基中能正常生长，在含有5～10mM KCl的培养基中生长缓慢，当培养基中KCl浓度低于0.5mM，R5421(CY162)细胞停止生长。R5421感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存六个月，pGADT7质粒检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
使用方法：
1.取R5421感受态细胞100μL于冰上融化的，依次加入预冷的目的质粒2～5μg，Carrier DNA (95～100℃，5min，快速冰浴，重复一次) 10μL，PEG/LiAc 500μL并吸打几次混匀，30℃水浴30min (15min时翻转6～8次混匀)。
2.将管放42℃水浴15min (7.5min时翻转6～8次混匀)。
3.5000rpm离心40 s弃上清，ddH2O 400μL重悬，离心30 s弃上清。
4.ddH2O 50μL重悬，涂板，29℃培养48-96h。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.R5421酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27～30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole (AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。
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